CAR-T细胞里的“隐形计数器”：qPCR如何给基因疗法上保险？

当医生告诉你“可以试试CAR-T疗法”时，你可能只知道这是一种能精准杀死癌细胞的“活药”，却未必清楚它背后藏着一个关键的质量密码——CAR拷贝数。这个听起来像计算机术语的指标，其实是决定CAR-T疗法成败的隐形开关，而qPCR技术正是破解这个开关的金钥匙。

▲示意图 | 来源网络

想象一下，你的免疫细胞里突然加入了一批“特种兵”，它们表面装着能精准识别癌细胞的GPS导航——CAR受体，一旦发现肿瘤细胞就会启动攻击。这些被基因工程改造的T细胞，就是CAR-T细胞。

但问题来了：每个T细胞里装了多少个CAR受体基因？装太少，癌细胞可能逃脱追杀；装太多，T细胞可能过度激活，引发致命的细胞因子风暴。这就像给士兵配枪，弹药不足或火力过剩都可能导致任务失败。

要知道每个细胞里有多少个CAR基因拷贝，常规显微镜根本做不到，这时，qPCR技术就派上了用场。

简单说，qPCR就像一台“基因复印机”，它能把CAR基因的特定片段成百万倍放大，同时通过荧光信号实时记录扩增过程。当荧光强度达到预设阈值时，机器会自动计算出初始模板的数量，进而得到CAR拷贝数。

▲示意图 | 来源网络

2017年，美国FDA批准首个CAR-T疗法时，就明确要求必须检测CAR拷贝数。2018年，中国食品药品检定研究院颁发的《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》也明确规定CAR基因拷贝数≤5 copies/细胞。

这个数字背后，藏着两重密码：

 · 安全密码：拷贝数过高会增加插入突变风险，可能诱发二次肿瘤。

 · 生产密码：它能反映基因转导效率，是衡量CAR-T 生产工艺稳定性的黄金指标。

未来，当你看到CAR-T治疗报告上的“拷贝数：3.2”时，或许会会心一笑，这个数字背后，是无数科学家用分子级的精准，为生命保驾护航。

山东省免疫细胞与基因治疗CDMO中试基地质量与检测中心可以为客户提供包括CAR拷贝数qPCR检测等多项检测服务，精准赋能CAR相关研发，严守项目安全与质量防线。中心具备符合国家GMP要求的细胞培养室、微生物限度室、无菌室、PCR实验室等功能区。配备BD FACS Cantoll流式细胞仪、BD PHOENIX全自动微生物鉴定药敏分析系统、RocheLight Cycler480l实时定量PCR仪、Thermo超高效液相色谱等国际先进检测设备。拥有先进的免疫细胞与基因治疗检测技术，涉及细胞生物学、分子生物学、免疫学、微生物学、病毒学和物理化学等六大类学科共计19个小项，依托世界尖端检测仪器设备，有效保障及控制在开发中安全性风险。