RCL全称“Recombinant Lentiviral Vector”，即复制型慢病毒载体。它以HIV-1（人类免疫缺陷病毒1型）为基础改造而来，保留了高效整合宿主细胞染色体的能力，但剔除了致病基因。

与普通慢病毒载体相比，RCL的复制能力使其感染效率提高 3-5倍，尤其对非分裂细胞（如神经元）的感染效果显著。体外实验中，RCL可稳定整合外源基因至宿主细胞DNA中，长期表达率超过90%。然而，正因为它的这种特性，可能会导致基因的意外改变，甚至引发以下潜在的安全问题，如免疫原性、插入突变风险等。

 ● 插入突变风险：研究显示，RCL整合位点可能干扰宿主细胞原有基因表达，导致癌变风险（概率约 1/1000-1/5000，需严格筛选安全载体）。 

 ● 免疫反应：临床试验中，约15%的患者对RCL载体产生免疫反应，需配合免疫抑制药物。

 ● 生物安全：复制能力使其存在环境扩散风险，WHO将其列为生物安全等级BSL-2级，实验室操作需严格遵循P3标准。

鉴于RCR/RCL的风险隐患至今仍不能排除，由2022年5月发布的《体外基因修饰系统药学研究与评价技术指导原则（试行）》指出RCR/RCL检测作为安全性检测在细胞药物的研发和生产过程中至关重要，相关产品不得检出RCL。

《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》中提到：根据现有法规和指导原则可以发现，RCL的检测方法主要包含指示细胞培养法、ELISA法、PCR/q-PCR法和PERT法。因为指示细胞培养法检测需28天，并且因为阳性对照病毒的性质，要求其需要在P3或者P2实验室环境中进行，致使该方法具有耗时长，环境要求高的特点。相比而言,基于VSV-G序列的q-PCR方法或基于psi-gag序列的PCR方法，因其具有检测时间短、环境条件简单、灵敏度高和可重复性强等优点，被许多CAR-T申报企业作为快速放行方法。

▲示意图 | 来源网络

山东省免疫细胞与基因治疗CDMO中试基地质量与检测中心具备符合国家GMP要求的细胞培养室、微生物限度室、无菌室、PCR实验室等功能区。配备罗氏LightCycler® 480 Instrument II实时定量荧光PCR仪，针对VSV-G基因，定量检测慢病毒载体生产的细胞治疗产品和基因治疗产品中可复制型慢病毒（RCL）。检测灵敏度可达1.5copies/μL，最快120分钟即可完成整个检测，加强细胞治疗产品安全性问题的监管和研究。中心配备BD FACS Cantoll流式细胞仪、BD PHOENIX全自动微生物鉴定药敏分析系统、RocheLight Cycler480l实时定量PCR仪、Thermo超高效液相色谱等国际先进检测设备。拥有先进的免疫细胞与基因治疗检测技术，涉及细胞生物学、分子生物学、免疫学、微生物学、病毒学和物理化学等六大类学科共计19个小项，依托世界尖端检测仪器设备，有效保障及控制在开发中安全性风险。